Hızlı Protokol ile Zamandan Tasarruf
SuperScript IV CellsDirect, güçlü bir SuperScript IV ters transkriptaz enzimi ve RNA'yı saflaştırma ihtiyacını ortadan kaldıran basitleştirilmiş bir cDNA sentezi iş akışı içerir. Tek bir tüpte bu temel yaklaşımla, pipetleme adımlarının ve manipülasyonların sayısını azaltarak RNA kaybı ve kontaminasyonunu önleyebilirsiniz. Sonuç, zamandan ve emekten tasarruf etmektir.
Üstün Hassasiyet ve Verim
SuperScript IV CellsDirect cDNA sentez kiti, rakiplerinden sürekli olarak daha iyi performans gösterir. Hela S3 hücreleriyle yapılan çalışmalarda, bir dizi hücre sayısı ve numune boyutunda duyarlıdır ve bol (ACTB), orta düzeyde bol (PGK1) ve düşük bolluk (BCL2) transkriptleri için daha fazla verim üretir.
Yüksek Çoklukta Gen Hedefi - ACTB
SuperScript IV CellsDirect cDNA sentez kiti, hedefe özel primerler kullanılarak bol miktarda bir transkript olan ACTB'den cDNA'yı sentezlemek için kullanıldı. Şekilde gösterildiği gibi rakiplerin kitlerine kıyasla üstün hassasiyeti ve verimi göstermektedir.
ACTB cDNA sentezi, bir SYBR yeşil tahlili ile analiz edilmiştir
 |
 |
ACTB'nin cDNA sentezi, bir SYBR Green tahlili kullanılarak analiz edildi. Numune başına 10 ila 10.000 hücre aralığını temsil eden bir HeLa S3 hücrelerinin seri dilüsyonu kullanılarak hücreler parçalandı ve her bir kit üreticisinin spesifikasyonlarına göre cDNA sentezlendi. Analiz, PowerTrack SYBR Green Master Mix kullanılarak yapıldı.
|
Verimi temsil eden CT farkının karşılaştırmasını gösteren çubuk grafik. Grafik, yüksek bolluk transkriptleri (ACTB) için hassasiyet ve verim gösteren yukarıda sunulan sonuçlardan aynı verileri kullanır.
|
Duyarlılık ve Verim-Düşük Çoklukta Gen Hedefi - BCL2
Düşük çokluk hedefleri için duyarlılığı ve verimi göstermek için hedefe özel primerler kullanılarak BCL2'den cDNA sentezlemek için SuperScript IV CellsDirect cDNA sentez kiti kullanıldı. Şekil 4 ve 5, rakip kitlere kıyasla HeLa S3 hücrelerinin (10 ila 10.000 hücre) tam 10 kat seyreltme serisi boyunca üstün hassasiyeti ve verimi göstermektedir.
SYBR yeşil testi ile analiz edilen BCL2 cDNA sentezi
 |
 |
BCL2'nin cDNA sentezi ve bir SYBR Green testi kullanılarak analiz edildi. Numune başına 10 ila 10.000 hücre aralığını temsil eden bir HeLa S3 hücrelerinin seri dilüsyonu kullanılarak hücreler parçalandı ve her bir kit üreticisinin spesifikasyonlarına göre cDNA sentezlendi. Analiz, PowerTrack SYBR Green Master Mix kullanılarak yapıldı.
|
Düşük bolluklu transkriptler (BCL2) için hassasiyet ve verim gösteren seyreltme serilerinde ürün ve rakip kitlerini gösteren yukarıdakiyle aynı verileri kullanan çubuk grafik.
|
Duyarlılık ve Verim-Orta Çoklukta Gen Hedefi- PGK1
Duyarlılığı ve verimi daha fazla göstermek için, hedefe özel primerler kullanılarak orta derecede bol bir gen hedefi olan PGK1'den cDNA sentezlemek için SuperScript IV CellsDirect cDNA sentez kiti kullanıldı. Şekilde gösterildiği gibi rakiplerin kitlerine kıyasla HeLa S3 hücrelerinin (10 ila 10.000 hücre) 10 kat seyreltme serisi boyunca duyarlılığı ve verimi göstermektedir.
 |
 |
PGK1'in cDNA sentezi ve bir TaqMan tahlili kullanılarak analiz. Numune başına 10 ila 10.000 hücre arasında bir numune boyutunu temsil eden HeLa S3 hücrelerinin seri 10 kat seyreltmesi kullanılarak hücreler parçalandı ve her bir kit üreticisinin spesifikasyonlarına göre cDNA sentezlendi. Analiz, TaqMan Fast Advanced Master Mix kullanılarak yapıldı.
|
Çubuk grafik, orta derecede bol transkript (PGK1) için hassasiyet ve verim gösteren seyreltme serilerinde ürün ve rakip kitlerini gösteren yukarıdakiyle aynı verileri kullanır.
|
Duyarlılık ve Verim - iPSC
SuperScript IV CellsDirect cDNA sentez kiti, İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücreler (iPSC) dahil olmak üzere birçok hücre hattında düşükten yükseğe bir dizi gen için sürekli olarak rakiplerinden daha iyi performans gösterdi.
 |
SuperScript IV CellsDirect cDNA sentez Kiti ile diğer ticari kitlerden (SuperScript III CellsDirect cDNA sentez Kiti (Invitrogen), SingleShot Probes Kit (Bio-Rad), FastLane Cell cDNA Kiti (Qiagen), RealTime hazır Hücre Lysis Kiti + Transkriptör Birinci Dizi cDNA Sentez Kiti (Roche) cDNA sentezi, liziz için 1000 insan iPSC kök hücre girişinden yapıldı ve TaqMan tahlilinde düşük ila yüksek ekspresyonlu çeşitli gen primerleri ile analiz edildi.
|
Doğrusallık
SuperScript IV CellsDirect cDNA sentez kiti, doğrusallık testleri sırasında sürekli olarak rakiplerinden daha iyi performans gösterdi.
SuperScript™ IV CellsDirect™ cDNA Sentez Kiti
SuperScript IV CellsDirect cDNA Sentez Kiti, ilk izole RNA olmadan doğrudan bir memeli hücre lizatından birinci iplikli cDNA'nın sentezi için optimize edilmiştir. Hücre lizizi ve ters transkripsiyon aynı tüpte gerçekleştirilir ve elde edilen birinci iplikçik cDNA, PCR ve qPCR'de kullanıma hazırdır.
SuperScript IV kitinin özellikleri şunları içerir:
- Farklı tedavi koşulları altında yetiştirilen çok çeşitli memeli hücre tipleri ile uyumludur
- Tek tüp formatı reaktif kaybını, numune kaybını ve kullanım süresini en aza indirir
- Toplam lizat hacmi, birinci zincir cDNA sentez reaksiyonunda kullanılabilir, bu da sınırlı sayıda hücre ile daha fazla verim sağlar ve nadir transkriptlerin saptanmasına olanak tanır
- PCR ve qPCR dahil olmak üzere çeşitli uygulamalarda kullanım için oluşturulan yüksek kaliteli cDNA
- Basit protokol yaklaşık 37 dakika sürer
- Çeşitli üreticilerin TaqMan ve SYBR Green qPCR ana karışımlarıyla uyumlu
- Numune başına 1–10.000 hücre için optimize edilmiş performans, saflaştırılmış RNA'dan elde edilenlere eşdeğer sonuçlar
SuperScript IV CellsDirect cDNA Sentez Kiti, SuperScript IV Ters Transkriptaz içerir. Bu enzimin özellikleri şunları içerir:
- Azaltılmış RNase H aktivitesi
- Daha yüksek termal kararlılık
- Daha fazla hassasiyet ve nadir transkriptlerin gelişmiş tespiti için birinci zincir sentez reaksiyonunda yüksek cDNA verimi
- Çeşitli RT inhibitörlerine karşı üstün tolerans
SuperScript IV ters transkriptaz, tüm RT-PCR ve qRT-PCR uygulamaları için en iyi seçimdir. RT reaksiyonlarında üstün sağlamlık ve güvenilirliğe sahip tescilli bir MMLV mutantıdır. Arttırılmış termostabilite, yüksek verimli tam uzunlukta cDNA sentezi ve azaltılmış RNaz aktivitesi dahil olmak üzere önceki enzimin tüm faydalarını korurken, inhibitör direnci, işlemsellik ve reaksiyon hızında SuperScript III ters transkriptaz üzerinde önemli ölçüde iyileştirilmiştir.
Nasıl çalışır?
Geleneksel RT-PCR'de RNA, önce hücrelerden materyal kaybına yol açabilecek zaman alıcı bir prosedürle izole edilir. SuperScript IV CellsDirect cDNA Sentez Kiti kullanılarak hücreler parçalanır ve cDNA, minimum işlemle ve numune kaybı olmadan tek bir tüpte lizattan üretilir. DNase I tedavisi isteğe bağlı bir adımdır ve birinci iplik sentezinden önce genomik DNA'yı ortadan kaldırmak için kullanılabilir. Bu kit, 10.000 hücreden tek bir hücreye kadar değişen küçük hücre örnekleri için optimize edilmiştir.
İçerik&Saklama Koşulları
- SuperScript IV CellsDirect Lysis Solution, 1.25 mL
- SuperScript IV CellsDirect Stop Solution, 250 µL
- Lizis Artırıcı, 25 µL
- DNAz I, 55 µL
- SuperScript IV RT Master Mix, 400 µL
- SuperScript IV No RT Control, 400 µL
SSIV CellsDirect Lysis Solution 4°C'de saklanabilir. Diğer kit bileşenleri (Stop Solution, DNase I, Lysis Enhancer, SSIV RT Master Mix ve SSIV No RT Control) –20°C'de saklanmalıdır.
- SuperScript IV CellsDirect Lysis Solution, 9 mL
- SuperScript IV CellsDirect Stop Solution, 1,25 mL
- Lizis Artırıcı, 250 µL
- DNaz I, 500 µL
- SuperScript IV RT Master Mix, 1 mL
- SuperScript IV No RT Control, 1 mL
SSIV CellsDirect Lysis Solution 4°C'de saklanabilir. Diğer kit bileşenleri (Stop Solution, DNase I, Lysis Enhancer, SSIV RT Master Mix ve SSIV No RT Control) –20°C'de saklanmalıdır.
|
|
| Örnek Tipi |
Hücreler |
| Nakliye Koşulları |
Kuru buz |
| Tespit Metodu |
Floresans |
| Ekipmanlarla Kullanım |
RT-PCR (Endpoint), Real-Time PCR |
| Format |
Tüp |
| GC-Rich PCR Performansı |
Yüksek |
| Reaksiyon Sayısı |
50 Reaksiyon |
| Test Sayısı |
50 Reaksiyon |
| PCR Metodu |
qPCR, RT-PCR |
| Ürün Grubu |
SuperScript™ |
| Reaksiyon Formatı |
SuperMix veya Master Mix |
|
|
| Örnek Tipi |
Hücreler |
| Nakliye Koşulları |
Kuru buz |
| Tespit Metodu |
Floresans |
| Ekipmanlarla Kullanım |
RT-PCR (Endpoint), Real-Time PCR |
| Format |
Tüp |
| GC-Rich PCR Performansı |
Yüksek |
| Reaksiyon Sayısı |
500 Reaksiyon |
| Test Sayısı |
500 Reaksiyon |
| PCR Metodu |
qPCR, RT-PCR |
| Ürün Grubu |
SuperScript™ |
| Reaksiyon Formatı |
SuperMix veya Master Mix |
Daha fazla bilgi için tıklayınız.
Yükleniyor...
