NuPAGE Bis-Tris ve Bolt Bis-Tris Plus Jellerdeki Bis-Tris kimyası, poliakrilamid jel matrisinin stabilitesini de destekleyerek, oda sıcaklığında saklamayı mümkün kılar ve bu da buzdolabı alanı ihtiyacından tasarruf edilmesine yardımcı olur.
NuPAGE Bis-Tris ve Bolt Bis-Tris Plus Jellerdeki nötr pH tamponları keskin düz bantlar sağlar. Ayırma sırasında jeller pH 7'ye yakın çalışır. Laemmli sisteminde (Tris-glisin), jel bazik pH'ta (pH ~9.5) çalıştırılır. Yüksek pH'da, polimerleşmemiş artık akrilamid, ayrılan proteinlerin sistein ve lizin artıkları ile reaksiyona girebilir. Bu, western blot transferi gibi aşağı akış analizini etkileyebilir. NuPAGE Bis-Tris ve Bolt Bis-Tris Gels'in nötr pH'ında, bu reaksiyonlar Tris-glisin jellerinin temel pH'ına göre birkaç büyüklük sırası daha yavaş gerçekleşir, bu da daha keskin bantlar ve daha iyi çözünürlük ile sonuçlanır.
Örnek hazırlama, başarılı protein analizinde çok önemli bir adımdır. Geleneksel Laemmli tarzı numune tamponunun pH'ı, 100°C'de ısıtıldığında 6,8'den 5,2'ye değişir. Bu düşük pH'ın, protein bozulmasına yol açan aspartil-prolil (Asp-Pro) peptit bağı bölünmesini indüklediği bilinmektedir. Invitrogen NuPAGE LDS Numune Tamponu ve Bolt LDS Numune Tamponu, >7.0 pH ortamını koruyarak bu Asp-Pro bölünmesini en aza indirerek protein bütünlüğünü korur.
Aşağıda görüldüğü gibi, Invitrogen NuPAGE sistemi ile elektroforez boyunca numune bütünlüğü korunur; Laemmli (Tris-glisin) numune tamponu ile hazırlanan numunelerde protein bozulması görülmektedir. Invitrogen NuPAGE Antioxidant çalışan tampon katkısı, elektroforez sırasında protein oksidasyonunu büyük ölçüde en aza indirir ve indirgenmiş protein bantlarını keskin ve net tutar.
Her bir Bolt jelindeki benzersiz kama şeklindeki kuyu, daha yüksek yükleme kapasitesi sağlar, böylece her kuyuya iki kata kadar daha fazla protein numunesi yükleyebilirsiniz.
Seyreltik numunelerde bile proteinleri tespit edin veya düşük miktarda proteinlerin ekspresyonunu ölçün. Numunenizi yüklemek için daha fazla alanla, artık batı lekelerinizde numunenin yayılması ve kuyular arası kontaminasyon hakkında endişelenmenize gerek yok. Jel yükleme, özel jel yükleme pipet uçları kullanmaya gerek kalmadan da daha kolaydır.
Kuyucuk Boyutu | Önerilen Yükleme Hacmi | Maks.Yük Hacmi | Maks. Protein Yükü |
10-kuyucuk | 40 µL | 60 µL | 0.5 µg/band |
12-kuyucuk | 30 µL | 45 µL | 0.4 µg/band |
15-kuyucuk | 20 µL | 35 µL | 0.25 µg/band |
17-kuyucuk | 15 µL | 30 µL | 0.2 µg/band |
|
NuPAGE Bis-Tris
|
Bolt Bis-Tris Plus
|
Ne zaman seçilmeli?
|
Kuyu ve jel formatında esnekliğe ihtiyacınız varken
|
Seyreltik numunelerle çalışma veya daha büyük numune hacimleri yükleme ihtiyacı veya daha hızlı çalışma süreleri gerektiğinde
|
Mevcut jel boyutları
|
Mini: 8 cm x 8 cm (1.0 or 1.5 mm kalınlık)
Midi: 8 cm x 13 cm (1.0 mm kalınlık) |
Mini: 8 cm x 8 cm (1.0 mm kalınlık)
|
Depolama koşulları
|
4–25°C
|
|
Raf ömrü
|
12 ay
|
16 months
|
Yüksek lottan lota tutarlılık
|
Rf değerleri (göç) için sadece %2'lik varyasyon katsayısı (CV)
|
Rf değerleri (göç) için sadece %2'lik varyasyon katsayısı (CV)
|
Önerilen numune tamponu
|
NuPAGE LDS Sample Buffer
|
Bolt LDS sample buffer
|
Önerilen çalıştırma tamponu
|
NuPAGE MES SDS or NuPAGE MOPS SDS Running Buffer
|
Bolt MES SDS or Bolt MOPS SDS running buffer
|
Çalışma süresi
|
35 dk (MES buffer)
50 dk (MOPS Buffer) |
20 dk (MES buffer)
35 dk (MOPS buffer) |
Önerilen transfer tamponu |
NuPAGE Transfer Buffer
|
Bolt Transfer Buffer
|
Jel kimyası
|
Bis-Tris
|
|
Mevcut poliakrilamid konsantrasyonları
|
8%, 10%, 12%, 4–12%
|
|
Ayrım aralığı
|
15 kDA to 260 kDa (MOPS buffer)
3.5 kDA to 160 kDa (MES buffer) |
|
Mini jellerle kullanım için ekipmanlar
|
||
Ayırım modu
|
Moleküler ağırlık
|
|
Uygulamalar
|
SDS-PAGE
|
|
Mevcut kuyu konfigürasyonları
|
Mini: 1, 9, 10, 12, 15, 17, 2D-well, IPG kuyu
Midi: 12+2, 20, 26 kuyu |
WedgeWell formatı: 10, 12, 15 17 kuyu (kuyu başına 2X'e kadar numune hacmi yükleyin)
|
Midi jellerle kullanım için ekipmanlar
|
SureLock Tandem Midi Gel Tank, Invitrogen XCell4 SureLock Midi-Cell or Bio-Rad Criterion (yalnızca adaptörlerle)
|
Midi için mevcut değil
|